细胞被支原体污染后的清除策略

细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等。

说起支原体污染，估计细胞培养的同学就开始犯愁了，细胞培养的老手都知道，支原体污染非常不易察觉。有的实验室被支原体污染后，如果不进行有效彻底的支原体清除，该实验的细胞培养很难进行下去，细胞传代3代以后状态就急剧下滑，无法进行正常实验，有的实验室甚至只能指望换细胞间。那么怎样才能有效检测并清除支原体污染呢?

1、支原体检测

荧光定量PCR法（qPCR）：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。

优点：①灵敏度高、特异性强。

②时间短，2-3小时出结果。

③检测结果可定量。

④操作简便。

缺点：①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）

②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。

德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒（均为探针法检测），依据操作步骤的细微差别，

分『经典法』和『一步法』两种。

2、环境空间消毒方案

试验台、超净台、培养箱、液氮罐、移液器、门把手、电话等细胞培养环境

被支原体污染，可引起细胞的污染。应定期对工作区域进行消毒。

德国MB生产的Mycoplasma-offTM喷雾剂，或湿巾擦拭 5-10分钟清除，对支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子祛除确切有效。无残留, 无腐蚀, 无致癌性，操作简单方便。