PCR检测实验室建设标准及预防核酸气溶胶污染的重要性

目前，聚合酶链反应（PCR）被广泛应用于疾病诊断，它可对疾病相关的ＤＮＡ 序列进行体外引物定向酶促扩增，从而具有极高的敏感性和特异性，是基因扩增技术的一次重大革新。新型冠状病毒肺炎（ COVID－19）被纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，采用甲类传染病的预防和控制措施，要求二级以上的综合性医院建立新型冠状病毒PCR检测实验室。

PCR核酸污染解决办法

按照国家相关要求，对PCR实验室进行了必要的升级改造，结合新型冠状病毒检测中发现的问题，制订了相应的新型冠状病毒PCR检测操作管理流程，现将新型冠状病毒PCR实验室的建设经验总结如下。

一、实验区域的划分

为了确保核酸在检测过程中不受到污染，需要加强实验防污染的建设，首先根据现有的实际情况，因地制宜合理挑选出合适检测核酸的地方进行规划、设计PCR实验室；按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》

1、将核酸实验室大体分为３个独立的实验区，即试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区；每个实验区都是独立的房间，不同的区与区之间有传递窗，共有一条长走廊，每个实验区有缓冲区并前后各有一道自动可关闭门，缓冲区在两扇门之间呈“Ｚ”字样。各实验区门上须有一个可视窗，各实验区进入实验室进行操作的走向呈单一方向，并必须遵守：PCR实验室大门→走廊→外门→缓冲区→内门→实验区内；４个实验区之间的走向应遵循单向的原则：试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区，不可逆向行走，避免出现交叉污染。实验室安装门禁（人脸识别），并设有权限，只允许PCR实验工作的人员才有资格进入，其他人员一律免入内。实验室的走廊上挂有试剂准备区制度、标本制备区制度、扩增及产物分析区制度等３块制度牌。

2、实验室标签的制作　为了便于区分每个实验室的不同，不同的工作区域使用不同颜色的标签贴在各实验区所用仪器设备上、穿不同颜色工作服。分别用白、蓝、绿、红等４种颜色制成标本接收区、试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区标签，每个实验区都统一按规定的唯一颜色制作规格大小相同的标签贴于本实验区的所有器材上。门上应贴有“生物危害标识”，生物安全标识内容主要包括生物安全标示、二级生物安全实验室、实验室名称、实验室负责人、联系电话、外来人员未经许可严禁入内等。

3、环境的控制

为确保外界空气不受污染，根据传染病的管理办法，核酸实验室标本制备区、扩增及产物分析区设定为负压，这样就可以防止室内空气外流。实验室要保证里面工作人员的舒适性，需安装空调，但空调不能采用中央空调，不同实验区之间是独立的排风通道，独立的排风系统，用监控系统控制室内环境，系统显示器安装在长走廊上，可以不进入实验区就可观看实验区内的温度、湿度、负压等。进出实验工作区应做到人、物分离，避免交叉感染，不同实验区之间有专用的用品，如手套、鞋套、防护服、帽子、口罩、消毒用品、垃圾桶、拖把等，摆放有序，并贴有本区专用颜色的标签，以便于区分不同实验区间的用品。

二、实验室生物安全管理

　　新型冠状病毒具有传染性，主要是通过呼吸道飞沫传播和接触性传播，检测操作会与标本直接性接触，进入PCR实验的前后都须严格按照规范做好防护，对仪器和物体表面、地面、标本转运箱、空气、防护服、手套等进行消毒处理，废弃物统一放在高压蒸汽灭菌锅里进行有效的消毒灭菌，从而有效避免二次污染。

三、新型冠状病毒PCR检测的质量控制

1、仪器、设备　对仪器、设备定期进行校准，保证仪器、设备正常运行，登记每天仪器、设备的运行情况和保养、维修记录等。

2、试剂　检测试剂是检测中必备的一环。为确保检测结果的准确性，更换新试剂时，应对新批号试剂进行验证，并保存原始记录及登记。

3、环境因素　检测时，环境也会对结果有一定的影响，如湿度、温度、污染等。每天都须对湿度、温度进行登记。

4、人员操作　工作人员要严格按操作流程进行规范操作，加强学习、培训。

5、室内质控　应每天进行室内质控评估。室内质控是保证实验结果可靠、准确的一项工作，是对该实验室检测前、中、后过程的评估。

6、室间质控　须定期参加室间质控，使本实验室检测的结果与其他实验室的结果有可比性，符合上海市临床检验中心的要求。

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7、预防核酸气溶胶污染

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