干货｜设备清洗验证

1. 目的：

根据 GMP 要求，在每次更换品种、批号或生产工序完成后，要认真按清洗 标准规程，对设备、容器、生产场所进行清洁或灭菌。为正确评估清洗程序的效 果，需定期对直接接触药品的设备进行清洗验证。

清洗验证实质上应是生产工艺验证的一个组成部份，尤其对设备的清洁、清场是防止交叉污染的手段。生产过程中的污染源通常反映以下情况：(1)细菌、霉菌、酵母菌等微生物；

(2)在生产工艺过程中产生的气体、蒸汽以及粉尘等；

(3)有关于生产方面的原材料，中间体、成品等夹带的杂质；

(4)灰尘、其它自然产生的各种废物；

(5)环境、机器设备、工具上所沾的残余物以及操作人员衣服上所沾着的物质；

上述情况作为交叉污染的原因来考虑，主要是（2）～（5）。

例如：在固体制剂生产过程中，由于存在粉尘飞扬和固体残留物，因此在 更换品种时极易造成微量污染，主要污染来自设备清洗不彻底。

在其它液体制剂中的生产设备清洗亦指从设备表面去除可见及不可见物质 的过程，这些包括活性成份及其衍生物、辅料、清洗剂、微生物、润滑剂、环境 污染物质、冲洗水中残留的异物及设备运行过程中释放出的异物。

设备清洗验证实际上是指采用化学试验等手段来证明设备按规定的清洗程 序清洗后，设备上残留的污染物数量符合规定的限度标准要求，清除了生产产品 受前批产品遗留物及清洗过程中所带来的交叉混杂或交叉污染。从而确保物料 （或产品）的品质符合质量标准要求，给患者亦提供安全、纯净、有效的药品。因此，清洗验证首先必须对直接接触物料的生产设备和容器具制定切实有效的清 洁程序（或标准清洗操作规程），并按其程序进行验证。

2. 清洗程序的建立

清洗程序一般应包括以下几个方面的内容。

2.1.清洗的原则规定

在什么情况下必须对设备和容器进行清洗，在清洗程序中应有明确规定， 通常可考虑以下几种情况：

——设备和容器连续使用一段时间后；

——当物料出现质量问题时；

——设备检修前后；

——设备和容器静置超过一定时间后，在重新使用前；

——每批生产结束时或更换品种时。

2.2.清洗剂的类型

物料的化学性质不同，其清洗剂类型的选择也会不同，因此在清洗程序中 要将所用清洗剂一一列出。

2.3.清洗方法和步骤

设备不同，清洗的方法和步骤亦将随之不同，因此应在各自的清洗程序中 作详细的叙述。

——清洗用的工具；

——清洗操作的顺序、方法、要求；

——清洗的地点；

——清洗后设备的恢复和管理。

2.4.清洗后的检查验收

清洗后的检查验收，可由车间专职质量管理人员负责进行，一般采用目视 检查法。

检查的内容包括：

——清洗记录是否完整，填写是否符合规定（清洗的设备名称、编号、清 洗日期、清洗方法依据、清洗者签字等）；

——清洗和设备或容器是否有已清洗标志；——设备或容器的内表面则否清洁。检查验收结束后，检查人员应在清洗记录上签名认可，如果清洗后的设备 或容器还须进行验证，则可在检查验收之后，履行请验程序。

3. 清洗验证方法

3.1.清洗验证方案的确定 确定清洗验证方案的内容如下：

l 确定需进行验证的过程、设备和部位；

l 确定需清洗时间、清洗液种类及用量；

l 确定需测试的内容和标准；

l 建立取样和化验方法；

l 设计清洗操作规程草案和数据分析的方法。在实际的清洗验证中，如果要对每个工艺过程，每个设备，每个清洁步骤 都进行清洗验证，则要耗费大量的人力、物力、时间和精力，而且几乎是不可能 做到的，所以具体的做法通常是采用：

(1). 接产品和设备分类；

(2). 根据分类，选择“最劣工况”进行清洗验证。因为，如果“最劣工况” 的清洗验证都能够的通过，则说明最难清洗的部位已得到清洁，对其它部位的清 洁应没有问题。“最劣工况”考虑的因素如下：

l 设备类型、构造及物料接触的内表面积；

l 设备生产的一组产品；

l 活性成份的无显著影响值；

l 日服用剂量；

l 批量。

首先从考虑活性成份的无显著影响值入手，经过科学计算确定最大允许残 留物浓度限度。然后对冲洗水质确认后进行清洗，最后对冲洗水样及取样棉签样 品进行化学和微生物检验，对冲洗溶剂样品进行化学检验，将所得结果与可接受 限度比较，若低于残留物浓度限度，则可证实清洗程序的有效性和稳定性。

清洗应包括操作室及设备清洗，两者均包括同品种的换批清洗和换品种的 清洗。同品种不同批之间的清洗主要考查洗后的直观效果，不作为验证项目。

设备按清洗程序清洗后，在将要生产的产品中，存有已生产产品活性物质 的残留量，原则上不能超过已生产产品活性物质浓度的 0.1%。再利用这个物质 的残留量——作为可接受标准限度。但是如果活性成份的效力过强，即使有 0.1% 的残留量混入其它药品，对人体也有影响，这时即采用活性成份的无显著影响值 代替活性物质浓度的 0.1%计算可接受限度。

设备在设计时就要注意到设备应易于清洗，特别是提倡就地在位清洗。拆装清洗要易于拆装。设备的清洗应有规定的清场和清洗方法。国内的几个合资企业，有的用去 离子水清洗，也有常水清洗后，再用 70%～75%酒精液清洗的。多半倾向于后者， 因为 70%～75%酒精溶液在清洗的同时，有灭菌作用。

附表：（1）清洗用水的种类，水质表 （表 1） 表（1） 清洗用水的种类、质量、用途以及管理叙述于下：

（2）清洗用水按剂型分类的用途（表 2）

表（2）（用△符号表示最理想的）

3.2.清洗验证的实施内容

3.2.1.建立标准清洗操作规程 清洗验证实际就是对标准清洗操作规程的验证。产品不同、设备不同，清 洗方法不同，检测方法亦可能不同。因此，通过验证建立合适的设备清洗标准操 作规程，验证内容包括清洁部位、清洗顺序，清洗时间、清洗液用量，洗涤剂的 种类和用量等。同时确定抽样方法和检测方法。

3.2.2.抽样方法的确定 清洗设备及验证抽样都必须与相应的制剂生产环境相同的条件下进行。为 测定机器设备部件清洗程度的正确的取样方法有四种：(1)洗液法：取清洗过程最终洗出液规定量作为被验样品的方法。适用于储 罐、包衣锅、管道等内部的残留物的测试。在试验方面必须根据检出的灵敏度规 定洗液量，如压片机清洗后，最终洗液为 100g。

(2)擦试法：指定洗涤过程中最终洗净的场所（定各机械设备洗涤点作为参 考），用纱布或棉签揩拭指定的面积作为被检物的方法，该法适用于各种机械表 面残留物的测试，这是最为常用的方法。要使其检出灵敏度高，取样部位必须选 择机械设备的边角，即最容易为固体残留物、液体沾污的地方作为清洗的关键点。如固体制剂设备中，粉碎机的粉碎腔成瓦楞状(如下图所示)，其表面结构最复杂， 加上表面在机器运行过程中受到冲击使表面光洁度极差，所以抽样位置应选择粉 碎机的粉碎腔。

具体方法: 用蹑子取棉签在蒸馏水中湿润，擦拭确定的抽样位置，每个棉 签取样面积为 25 ㎝ 2，共取 100cm2。将取样后 4 个棉签放入 100ml 蒸馏水中用超 声波洗涤 2 分钟。洗涤液进行紫外分析。

(3)模拟法：清洗完成后加入乳糖等（液剂情况则用水），在生产准备和生 产以后取出规定量作为被检物的方法。该法用于机械的细小部位，以擦试法取样 有困难的场所的残留物测试。(4)成品法：清洗完成以后，加入下一次实际生产的混合物，取出规定量， 作为被检物的方法。产品此法测量，是一个最为实际的方法，根据残物测度的结 果，如果确定污染必须作为不良产品废弃。上述诸方法各有特点，可根据这些机器、器皿以及产品的剂型等单独或合 并选择一个最为合适的方法。但均必须作有无残留物的测试。

图：擦拭法取样示例—粉碎机的粉碎腔成瓦楞状

表 3 ：清洗验证取样操作方法示例

表 3 清洗验证取样操作方法示例

3.2.3.设备清洗的具体操作

（1）确认清扫的彻底性

必须清洗的工作室以及有关的机械设备等，为了防止在生产中误用，要确切做好下列几项工作：

l 对“已清洗”、“清洗中”要有标示牌，表示状态；

l 没有“已清洗”等标牌的器物，一律不得使用；

l 生产开始前，必须再次检查确认清洗记录。

(2) 清洗剂的选择

需要清洗的设备，根据机械的结构，材料的性质以及被洗药品的物性，作种种适当的选择如：

l 用过青霉素类制剂的机械设备，用4%次氯酸钠，将青霉素类分解除去。

l 当要除法难溶于水的药品时，采用酒精类等一合适的溶剂来溶解后除 去，通常所用的醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。

l 其它的洗涤剂，根据药品的特性可以选用中性洗涤剂或碱液等。如需 灭菌或消毒，通常应用 75%乙醇或 0.5%洗必泰的 70%乙醇液。

（3）洗涤工具

作为洗涤所用的工具，要注意采用适应各自特点。要清洗设备，根据其机 械结构、材料的质地，作合适的选择。例如：

l 用于揩试的布巾要边缘光洁，布巾无绽线；

l 根据特性在长纤维布料或者是皮制品中作适当的选择；

l 毛刷、抹布等卫生工具要注意用不脱落毛的。

l 海绵等要注意有否磨损。

（4）服装及试验用工具

（5）防止清洁后的污染 清洗以后的机械及另件，在保持清洁防止污染的同时，必须确认在启用时 是不污染的。

3.2.4.清洁的检测方法及可接受标准限度。

检测方法的确定亦是清洗验证中重要的一项，清洗的最终评价根据产品活 性成分即主料及洗涤剂的残留量，所以，检测方法必须与被检出的物质的性质有 特定的相关性，较高的灵敏度及操作方便性等。检出结果应规定最高限量或不得 检出。常用的方法有：

l 直接 紫外 吸收测定法：由 洗液法所得的清洗 液，或 者由擦试法 从纱布（棉签）所得的抽出滤液，以蒸馏水作为冲洗液和空白对照液。检查方法 按国家药品监督管理局 WS-444(X-348)-98 标准方法检测。 洗涤液是否冲洗干净检查方法: 检查硫酸盐。可按中国药典 2000 版二部蒸 馏水的硫酸盐检查法。

l 目测法；

l 比色法；

l PH 测定法；

l 薄层色谱法：以溶媒在样品中提取物，通过薄层色谱层色法来测定有 无污染。将溶媒提取液浓缩，可以提高检出灵敏度。

l 生物测定法：针对青霉素类和甾体激素类药物的清洗后测定。青霉素 类检出限度为不得检出，甾体激素的检出限度为 0.1～0.2PPM。

l 效价测定法：用于各类抗生素药物清洗后的检测。

可接受限度范围的指标

（1）任何产品不能受到前一种带来超过其 0.001 的日剂量的污染；

（2）污染不能超过 10PPM（百万分之十）；

（3）不能有可见的残留痕迹。

4.清洗验证的评价方法

4.1.清洗的化学验证

残留量限度的确定

残留限度是评价清洗程序是否适用、有效的标志，因此它的确定在建立清 洗程序是头等重要的。限度过宽，会丧失对清洗有效性的保证；限度过严，又会 对清洗操作增加许多不必要的苛求，因此，应特别重视残留量限度的确定。

（1）确定残留量限度应注意的几个问题：

①是专用生产线，还是多用生产线。所谓多用生产线是指在一套设备中交 替生产多种产品情况；

②是终成品，还是中间产品，即对物料质量品质的要求程度；

③物料清洗的难易程度，即物料在清洗剂中的溶解度大小。

（2）总残留量的计算：

确定残留量限度时，首先要知道允许残留最大物料总量，它主要是依据物 料的质量标准要求来估量和推算的，一般可使用以下经验公式进行计算。

WA=GB×a×k

式中 WA-清洗后前一物料 A 所允许的总残留量（kg）；

GB-清洗后待生产物料 B 的批量（kg）；

a- 物料 B 所允许的杂质含量（%）；

k – 保险系数。

（3）残留量限度的表示方法及计算：对应于采样技术的不同，可使用两种 残留限度表示方法:

①单位体积毫克数，即 mg/ml，此种表示方法适用于洗出液取样的情况。其 限度是用总残留量除以最后一次清洗剂用量体积而得。

即：WA×106 mg/V 清洗剂（ml）

②单位面积毫克数，即 mg/cm2，此种表示法适用于棉签取样的情况，其限度 是用总残留量除以设备或容器内表面积（cm 2）而得。

即：WA×106 mg/S 内（cm 2）

(4).残留量限度的计算举例：

(A).清洗设备：结晶罐

假设条件为：

V=4000L

ψ=180cm

H=150cm

采样技术：棉签取样（25cm2）

残留量允许比例：0.025%

保险系数：1%

批产量：250kg

计算：

① 结晶罐内表面积：

② 残留量：

250kg×0.025%=0.0625kg

③ 均匀分布条条件下的单位残留量限度：

④ 25cm2残留量限度:

0.567mg/cm2×25=14.18mg/25cm2

⑤非均匀分布条件下使用的残留量限度：

14.18mg/25cm2×1% =0.142mg/25cm2

(B). 生产过一组产品的设备清洗:

①设备生产的品种

该组设备用于生产尼美舒利片、克拉霉素分散片、盐酸西替利嗪胶囊三个品种。产品的有关参数如表 4 所示:

②抽样可接受标准：

(A). 生产结束后，按规定的清洁程序清洗设备，用目检可见残留物或残 留物气味。

(B). 最难清洗部位棉签抽样，清洗后，每个抽样棉签最大允许残留量， 即单位为(μg/4in2 ) (以下计算 A 代表尼美舒利；B 代表克拉霉素；C 代表盐酸 西替利嗪)。

用 0.001 的日剂量作为考核指标计算产品 B 受产品 A 残留物污染的量:

那么，车间几个品种受产品 C 残留污染的最保守的数字 47.10 μg/4in2 可 选作为 0.001 的日剂量的许可指标。

(C).冲洗溶剂取样，每毫升冲洗溶剂中最大允许残留量为：

4 ×47.1 /100 = 1.88μg/ml

(D).最终冲洗蒸馏水溶液取样，同时以冲洗用蒸馏水为空白作对照，采用 紫外分光光度法分析。可接受标准：盐酸西替嗪 ≤1.88μg/ml，波长 230nm。③洗涤剂冲洗程度的检查：

硫酸盐法 : 取 50ml 化学取样，加入氯化钡试液 2ml，不得发生浑浊。

清洗验证对洗洁精的冲洗检查：洗洁精的主要成分有直链烷基苯磺酸钠和脂 肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐，如果冲洗液取样的硫酸盐检查能达到蒸馏水的质量要 求，说明冲洗符合工艺要求。

4.2.清洗的微生物验证 清洗的微生物验证应该与清洗的化学验证同步进行，也就是说在进行化学 验证的同时，也要进行微生物验证，这样做的目的是要使两种验证时的验证对象 处在同等状态，从而保证验证结果的真实。

4.2.1 微生物验证的采样方法

（1）洗出液取样法：凡以水作清洗剂的，可直接收取最后一清洗水约 100ml 作试样；

（2）棉签取样法：即用灭菌棉签蘸取少量灭菌生理盐水，在验证对象的规 定大小内表面上擦拭后，放入灭菌试管内备用。

（3）压痕板取样法：取制备好的普通肉汤琼脂压痕板及虎红琼脂压痕板， 在取样点痕取样。

4.2.2.检验方法：

（1）清洗水样：按工业用水质量检验操作规程中的微生物检验法进行；

（2）棉签取样法：从试管中小心取出棉签放入灭菌容器中，用少量灭菌生 理盐水分次洗涤试管，洗出液并入容器，补加灭菌生理盐水至约 100ML，摇振， 用蔡氏滤器过滤，将滤膜放入制备的普通肉汤琼脂平板上，在37℃培养 48h，计 数。

（3）压痕板取样法：分别 37℃培养 48h，与 25℃培养 72h 计数。

5. 清洗验证结论

总结验证结果，整理验证 告，由验证小组成员评价验证 告内容和结论。