TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书
工作原理:在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase )可以将DI GAO XIN标记的dUTP (DIG-dUTP)标记至3’-OH末端,DIG-dUTP结合在DNA断点部位,可以通过生物标记的抗DI GAO XIN抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后,再结合链酶亲和素-荧光素FITC(SABC-FITC)。FITC在490-495nm激化,在520-530nm发射荧光,呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色,从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒内容:
1. 标记缓冲液(Labeling Buffer) 1ml
2. 末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20) 20μι
3. DIG-dUTP (×20) 20μι
4. 封闭液(Blocking Reagent) 4ml
5. *化抗DI GAO XIN 抗体(× 100) 20μι
6. SABC-FITC (× 100) 20μι
7. Proteinase K (×200) 50μι
8. 抗体稀释液4ml
9. 阳性对照片2 张
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒用户自备试剂:
1. 多聚赖氨酸或APES(卡迈舒公司有售)。
2. 0.01M TBS,pH7.5 (配法:1L 双蒸馏水中加入8.5 克氯化钠,1.2 克Tris 和0.45—0.5ml 纯乙酸)。
3. 水溶性封片剂或荧光衰减封片剂(卡迈舒公司有售)。
4. DAPI染色液。
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