土壤碱性磷酸酶试剂盒活性测定

土壤碱性磷酸酶测试盒:  :

测定意义：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷
的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到
土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 显著影响，通常按照其zui适pH 范围，分为碱性、中性
和酸性三种类型磷酸酶。
测定原理：
碱性环境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成*和*，通过测定酚的生成
量即可计算出S-AKP/ALP 活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL 玻璃比
色皿、冰、蒸馏水、500ml 试剂瓶，96%乙醇和甲苯。
试剂组成和配制：
试剂一：液体，100ml×1 瓶，4℃避光保存；
试剂二：粉剂，1 支，用前加500ml 双蒸水充分溶解，4℃保存；
试剂三：液体，5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂，1 支，临用前加96%乙醇1ml 充分溶解，4℃避光保存；
标准品：液体，1mL×1 支，0.05mg/ml 酚标准液。
粗酶液提取：
称取风干土壤0.5g，加入0.25mL 甲苯，轻摇15min；加2ml 试剂一并且摇匀后，置于37℃
恒温培养箱，培养24h；培养完成后，加入10ml 试剂二充分混匀，10000rpm 室温离心10min，
取上清置于冰上待测。
测定步骤：
按下表操作：
充分混匀，显色后加双蒸水870μl，室温静置30min，用蒸馏水调零，于660nm 处检测各
管的吸光值。注意：空白管和标准管可以只做1 管。
S-ALP 活性计算：
S-AKP/ALP 活力单位定义：每克土壤每天释放1mg 酚定义为一个活力单位。
S-AKP/ALP（U/g）=612.5×0.05×（OD 测定管-OD 空白管）÷OD 标准管÷0.5
=61.25×（OD 测定管-OD 空白管）÷OD 标准管
注意事项：
1、试剂一和试剂四均需避光保存；
2、试剂四变褐色后不能再使用；
3、加完双蒸水室温静置30min 后，可用酶标仪进行测定；
4、为保证分母的统一性，土壤需风干，但不能烘干，烘干会导致酶失活。