可乐耐热耐酸菌的检测方法

1  介绍浓缩果汁中有时含有导致腐败的芽孢菌，耐酸耐热菌，也叫TAB，它们的特点是：1）  能耐热的孢子；2）  能耐果汁中的酸；3）  能在含有很少量的氧中生长；这个程序描述了检验浓缩苹果清汁（比如苹果）的TAB的检验方法。2   设备和试剂2.1  设备2.1.1  三角瓶：1000ml。2.1.2  灭菌的99ml的去离子水的稀释空白。2.1.3  磁力搅拌棒。2.1.4  带有搅拌器的加热盘。2.1.5  塑料注射器：10ml。2.1.6  注射用的滤膜装置（0.45um）。2.1.7  灭菌培养皿：90mm。2.1.8  恒温水浴锅：74-76°C。2.1.9  恒温培养箱：43±1℃。2.1.10 广口灭菌吸管：25ml。2.1.11 一次性的带有螺旋盖子的试管。2.1.12 可以无菌过滤0.45um的过滤装置。2.1.13 异丙基酒精。2.2   试剂2.2.1 酵母粉（VWR DF0127-15）2.2.2 蛋白胨（VWR DF0118-15）2.2.3 琼脂粉（VWR DF0145-17）2.2.4 葡萄糖（VWR EM-DX0145-11）2.2.5 吐温80（VWR JTX 257-7）2.2.6 苹果酸（VWR JTP494-7）3   操作步骤3.1 配制K氏培养基，在一个1升的烧瓶中，加入：3.1.1 去离子水：500-mL3.1.2 酵母粉： 1.25-g3.1.3 蛋白胨： 2.50-g3.1.4 琼脂粉： 7.50-g3.1.5 葡萄糖： 0.50-g3.1.6 吐温80：0.50-mL3.1.7 磁力搅拌装置或者直接购买K氏培养基，按照厂家的说明配制。3.2  加热使药品充分溶解。3.3  轻轻的盖上烧瓶的塞子，将培养基在15磅下高压灭菌25分钟。3.4  在一个小烧杯中加入1.0克的苹果酸和10 ml去离子水，搅拌使其溶解。3.5  将苹果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。3.6  在塑料注射器的末端进行无菌的滤膜过滤。3.7  K氏培养基灭菌结束后，将苹果酸的溶液用注射器无菌的滤膜过滤到K氏培养基中，充分摇匀。3.8 当培养基冷却到大约50°C时，将酸化后的培养基倒入到一次性培养皿中。3.9 等待培养基凝固后，在≤5°C的条件下冷藏，可以保存60天。3.2  采样3.2.1 样品不必采取无菌的方式采集，但是要防止和其他样品的交叉污染。3.2.2 采样的容器必须是灭菌的。3.2.3 取样时，从大桶中取样出来所用的器具应先用水清洗，然后在200ppm的有效氯中浸泡后，才可以浸入大桶中取样。3.3 热冲击3.3.1 调节水浴锅到74-76°C。3.3.2 用一个广口吸管吸取1ml样品于带有盖子的试管中，准备测试。3.3.3 加入10ml灭菌水。3.3.4 紧紧的盖上试管的盖子。3.3.5 将此样品放到水浴锅中，用计时器计时13分钟。4  数据分析4.1  将热冲击后的样品加入到99ml的灭菌水空白中，充分混匀。4.2  用一次性的0.45um的滤膜过滤稀释液。4.3  移开过滤器的上部。4.4  将镊子的在酒精中浸后，点燃灭菌。4.5  用这个灭菌的镊子将滤膜夹到K氏培养基上。4.5  轻敲滤膜使它紧贴到K氏培养基上。4.6  盖上培养皿的盖子，把培养皿包起来，以减少培养基的干燥。4.7  在培养箱底部的架子上放一盘去离子水，以保证培养箱内潮湿防止培养基干裂。4.8  放置培养皿时，将培养皿的盖子朝下。4.9  在43°C 下培养 5天，记录滤膜上的菌落数，它们是1ml的浓缩果汁样品的TAB数目。 参考资料：Coca Cola公司耐热耐酸菌的检测。