小鼠(Mouse)(HYD) ELISA检测试剂盒说明书

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试验原理:
HYD试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知HYD浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将HYD和*标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HYD的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T)
塑料膜板盖 1块 半块
标准品:240ng/ml  1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
*标记的抗HYD抗体 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
亲和链酶素-HRP 1瓶(12ml) 1瓶(5ml)自备材料:
1.  蒸馏水。
2.  加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.  振荡器及磁力搅拌器等。
4.

样品收集、处理及保存方法:

 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原
和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红

细胞迅速小心地分离。
2、  血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、  细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、  组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
 5、  保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作注意事项:

●   试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
●   使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
●   底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
●   加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

 

安全性:

  避免直接接触终止液和底物A、B,一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
  实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
  不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
结 果 判 断 与 分 析:

  仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
  以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的HYD标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的HYD含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
  检测值范围: 0-240ng/ml
  敏感度:0.1ng/ml

洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml)
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)

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