公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法

中华人民共和国国家标准公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细 菌 总 数 测 定GB/T 18204.4-20001 范围本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具细菌总数的测定方法。本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具细菌总数的测定。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准版本的可能性。GB /T 18204.2-2000 公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定3 定义本标准采用下列定义。细菌总数aerobicbacterialcount指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等）,25 cm²表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。*法 涂抹法4 仪器见GB/T 18204. 2-2000中第4章5 培养基和试剂见GB/T 18204.2-2000中第5章。6 检验程序见GB/T 18204. 2-2000中第6章。7 操作步骤7.1 采样方法7.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。7.1.2用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的*各25cm²（5cm ×5cm）面积范围;床单、被单在上下两部各25cm²面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入10mL生理盐水内，4h内送检。7.2 检验方法7.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。7.2.2 以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注人到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 mL加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。7.2.3 将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃士1℃培养箱培养48 h.8 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数;若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式（1）计算: M=k·n/2 式中:M— 细菌总数，cfu/25 K— 稀释倍数; n— 平均菌落数。9 菌落数 告方式见GB/T 18204. 2-2000中第9章。

第二法戳印法

10 原理用特制的内径为3.57cm 的培养皿，注入营养琼脂培养基，使其表面比皿边高2-3mm。采样时将培养基表面和被检物品表面吻合，轻轻按压3-4s，使其被检查物体表面能够均匀地与培养基表面接触。然后盖上皿盖，置恒温箱37℃培养24 h后，计数培养基表面（10cm,）生长的细菌菌落数。11 培养基和试剂11.1营养琼脂培养基11.1.1成 分:蛋白胨   10g 牛肉膏   3 g 氯化钠   5 g 琼脂 15-20g 蒸馏水  1000 mL11.1.2 制法:将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.4-7.6 ，过滤、分装于玻璃容器中，经121℃灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

12 仪器

12.1 高压蒸汽灭菌器12.2 干热灭菌器12.3 恒温箱。12.4 冰箱。12.5 特制戳印平皿（内径3.57cm）,12.6 制备培养基用的一般器材。13 检验步骤13.1 将溶化并冷至50-55℃的营养琼脂培养基，倾注于已灭菌的特制戳印平皿内（使皿内部培养基平面比皿边缘高2-3 mm），每皿约10 mL，待凝固后，盖上皿盖（皿盖与培养基隔一定空间），翻转平皿，在4℃下保存备用。13.2 将被检物品放平，再将皿盖打开，放在被检物品表面上，用手轻轻按压3-4s，取下，盖上皿盖，置37℃恒温箱内，培养24 h后观察结果，计数细菌菌落数。14 结果计算用肉眼观察，点数培养基表面菌落数，其细菌总数为10cm,（每皿）表面积的菌落数。本法简 便易行、可靠，可直接采样做细菌培养。