HPLC分离测定*及其降解产物

摘　要：

目的：建立新的HPLC分离测定*及其降解产物的方法。方法：色谱条件为：Nova-Pak C18色谱柱；0.02mol.L-1*溶液（pH4.5）-乙腈（95∶5）为流动相；检测波长为230 nm。

结果：在0.24～1.20mg.ml-1的浓度范围内线性关系良好，r=0.9991，平均回收率为100.6%（n=5），RSD＝0.47%，重复进样RSD＝0.06%（n=5），*及其降解产物得到基线分离。

结论：本法简便、快速、准确，适用于*的含量测定及其降解产物的检查。

1　仪器与试药

日本岛津LC-6A液相色谱仪，SPD-6N紫外-可见检测器，C-R4A色谱数据处理机。
氨苄*三水物（*）对照品（批号410-9402，含量85.6%，中国药品生物制品检定所）；注射用*钠（批号961210，961248，970302，石家庄市第二制药厂）；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。

2　方法与结果

2.1　色谱条件

色谱柱：大连化学物理研究所Nova-Pak C18（4.6 mm×200 mm,4 μm）；流动相：0.02mol。L-1*溶液（pH4.5）-乙腈（95∶5），薄膜（0.5 μm）过滤并脱气；检测波长为230 nm；流速：1.3ml。min-1；灵敏度：0.08 AUFS；进样量：20 μl。

2.2　系统适用性试验

碱性降解产物的制备：称取*对照品，用0.01 mol。L-1氢氧化钠溶液制成0.6 mg。ml-1溶液，放置30min，然后用磷酸调节溶液pH值至（4.5±0.1），量取5 ml置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述溶液20 μl注入色谱仪，在上述色谱条件下分离，得色谱图（图1），从图中可见，*峰的保留时间约为12min，*与降解产物实现基线分离。理论塔板数以*峰计为2700，*峰与相邻降解产物峰的分离度为7。

2.3　线性关系

精密称取*对照品适量，用流动相制成2.4 mg。ml-1溶液，精密量取1，2，3，4，5 ml分别置10ml量瓶中，用流动相定容，摇匀。在上述色谱条件下各进样20 μl测定。结果*在0.24～1.20mg。ml-1的浓度范围内峰面积（A）与浓度（c,mg。ml-1）线性关系良好，回收方程为：A=201690c+5050,r=0.9991。

2.4　精密度试验

取*对照品，用流动相制成0.6mg。ml-1溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，峰面积的RSD为0.06%，精密度良好。

2.5　重现性试验

精密称取同一批号样品5份，按样品测定方法操作。结果RSD为0.40%。

2.6　回收率试验

精密称取已准确测定含量的注射用*钠，准确加入适量*对照品，用流动相溶解，按样品测定项下方法测定，结果见表1。
表1　回收率测定结果.n=5

加入量/mg 测定量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
11.81 11.93 101.00
11.95 12.01 100.50 100.60 0.47
12.01 11.9999.80
12.12 12.19 100.60
12.24 12.35 100.90

2.7　样品测定
精密称取注射用*钠样品3批各适量，分别用流动相稀释成0.6mg。ml-1溶液，在上述色谱条件下进样测定。另精密称取*对照品适量，同法稀释测定。以外标法计算含量，面积归一化法检查降解产物，结果见表2。

表2　样品测定结果.n=3

批号 含量/% RSD/% 降解产物/%
961210 86.97 0.18 0.79
961248 86.28 0.15 0.84
970302 87.09 0.11 0.77