*酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
1 使用目的:
本试剂盒用于检测动物组织(鸡、猪、牛、鱼、虾等)、牛奶和蜂蜜中*(ADH)残留的定量检测。
2 实验原理
本试剂盒采用竞争 ELISA 方法,在微孔板包被有*(ADH)偶联抗原,加入*(ADH)标准品或样品,游离*(ADH)与微孔条上预包被的*(ADH)偶联抗原互相竞争抗*(ADH)抗体酶标记物,用 TMB 底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在 450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中*(ADH含量成反比,通过标准曲线计算样品中*(ADH)的含量。
3 试剂盒组成
3.1 预包被的*(ADH)偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔8条)。
3.2 *(ADH)标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是: ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb。
3.3 抗*(ADH)抗体酶结合物:1 瓶(6ml)。
3.4 显色液 A:1 瓶(6ml)。
3.5 显色液 B:1 瓶(6ml)。
3.6 终止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。
3.7 *:1 瓶(10×, 6ml),用于样品稀释用。
3.8 浓缩洗涤液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9 说明书一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有*(ADH),使用时应特别注意,操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的*,否则会影响实验果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1 *(ADH)标准品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb
7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用
7.3 *:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
7.3 显色剂:已备用,避免光线直照
7.4 反应终止液:已备用
8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman 滤纸过滤
8.4取25μl处理后的样品,加入25μl*于反应孔中(样稀释倍数为2)
9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样