糖分析是HPLC的典型应用之一,它广泛的应用在许多测试中用以确定膜的性能,一方面可以通过糖分析来确定膜去除糖分子的能力,另一方面也可检测膜固定化酶的活性。在***分析中,目前通常采用薄层色谱法(TLC)、气体色谱法(GC)以及高效液相色谱法(HPLC)进行糖分析。尤其是当混合物中包含几种必须要分离的糖分类型时,更加需要使用这些方法。
使用arium? pro VF纯化水作为洗脱液
HPLC所需的特殊品质的水可以从多家生产商处购买,也可以使用一个水纯化系统在现场直接生产,比如arium? pro VF系统。下面描述的是分离糖混合物的实验,其中的流动相(洗脱)使用的是由arium? pro VF生产的超纯水。
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材料和方法
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结果
1. 各种糖经 HPLC色谱柱后的分离结果。黑色曲线:糖混合物 在确定好每一种糖之后,便开始制备并分离糖混合物(图5)。
图5: 单一注射的糖样品的分离结果以及糖混合物用超纯水经交联8 % Na+的Rezex RNM
2. 通过注射磷酸钾缓冲液和自来水来模拟污染物的效应或盐的影响(图6)。
注射的自来水电导率为265μS/cm,磷酸钾缓冲液的电导率为1700μS/cm,两者都显示了清晰的信号,因而可以明显地辨别为污染物。在本次分析中使用的arium?超纯水的电导率为0.055μS/cm,基本不含干扰性杂质,表现为波形平坦,没有波峰产生(见图6中的绿色基线)。
图6:2μl的10mM磷酸钾缓冲液,2μl的自来水以及2μl的arium? pro VF超纯水的色谱图。
分析运行过程中的柱压恒定地维持在23bar(~ 334psi)。这表明了在色谱柱内没有沉积物累积。开始和结尾的空白运行未显示出任何改变;亦即,在流动相中没有污染物。
对不同浓度的标准系列进行分析,以确定重现性和检测限值。以棉子糖作为这些分析的例子。保留时间和峰面积均被记录并在表4中列出。
不断重复获得一致的保留时间说明了具有优异的重现性。棉子糖标准系列显示了一条浓度高达0.015mg/ml的线性曲线(图7)。
图7:棉子糖和arium? pro VF超纯水通过Rezex RNM Carbohydrate Na+ 8%色谱柱的标准系列(数值来自表4)。
结论
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